|
|
|
АНГРО Другое Препараты китайской медицины Травы |
| Назад к списку статей |
||||||||||||||||||||||||||||
Исследование противовирусных свойств ингредиентов препаратов традиционной китайской медицины. Дёмина О.К. |
||||||||||||||||||||||||||||
Демина О. К., Шиков А. Н., Сергеев А. А., Твердохлебов А. В., Берилло С. А., Сергеева Е. И., Агафонов А. П.
Федеральное государственное учреждение науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека РФ, п. Кольцово, Новосибирская область
Анализ научной литературы показал, что многие препараты, полученные из растений, обладают ярко выраженным антивирусным действием и широко используются как в народной, так и в традиционной медицине. Количество исследований, посвященных изучению противовирусной активности препаратов на основе растительного сырья, увеличивается из года в год, и все больше средств внедряется в практику здравоохранения. Преимуществом лекарственных растений является высокая биологическая активность при сравнительно низкой токсичности, хорошая переносимость пациентами и, как правило, отсутствие серьезных побочных реакций. Природные препараты в ряде случаев обладают большей терапевтической широтой (границы между лечебной и токсической активностью), а также возможностью длительного применения и другими преимуществами перед синтетическими препаратами, в связи с чем многие из них уже много десятилетий успешно конкурируют с препаратами, полученными на основе химического синтеза. Результаты применения лекарственных растений удобно прослеживаются и врачом, и больным, что психологически активно влияет на лечебный процесс.
В литературе есть многочисленные свидетельства о противовирусной, противомикробной и противоопухолевой активности препаратов на основе трав, произрастающих на территории Китайской Народной Республики (Eunkyue Park etal., 2005; BeleA.A. etal, 2009). Известен иммуномодулирующий и противовирусный эффект водных экстрактов китайских трав (препарат «Ban Lan Gen»), которые были использованы для лечения больных при вспышке SARS в КНР в 2003 году (Poon P-M etal., 2006). Известно, также, что жимолость японская, вайда корень и вайда лист обладают противовирусной активностью по отношению к вирусам гриппа, простого герпеса, гепатита В, С и даже ВИЧ в экспериментах in vitro (Chang Pu Tao, 2002).
Целью настоящей работы было изучение противовирусного действия отваров трав, произрастающих на территории КНР (одуванчик (Taraxacum officinalis Web.), пион красный (Paeonia officinalis, Paeonia peregrina), жимолость японская (Lonicera japonica), вайда красильная (Isatis tinctoria L.) в экспериментах in vitro на чувствительных культурах клеток с использованием вирусов гриппа, кори, паротита и in vivo на модели мыши с использованием вируса гриппа птиц (ВГП) субтипа H5N1. Приготовление отваров китайских трав производилось по общепринятой методике в одинаковых условиях для каждого эксперимента (Дзюба В. Ф., 2004).
В работе использованы вирус кори (штамм NovO96,) и вирус паротита (штамм Драгун), полученные из коллекции микроорганизмов ГНЦ ВБ «Вектор». В экспериментах по исследованию противовирусной активности отваров в отношении вируса гриппа был использован штамм А/Aichi/2/68 (Н3N2), полученный из Института вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН (Москва).
В экспериментах in vivo использовали ВГП штамм A/Chicken/Kurgan/05/2005 (субтип Н5N1), полученный из коллекции микроорганизмов ГНЦ ВБ «Вектор».
Оценку цитотоксического действия отваров китайских трав проводили на клетках Vero и MDCK. В лунки 96-х луночных планшетов с монослоем клеток Vero или MDCK вносили исходные отвары изучаемых трав в разведениях 1:10, 1:100, 1:1000. Действие препарата на клетки оценивали на 5 сутки по отслоению или разрушению (лизису) клеток.
Изучение противовирусного действия приготовленных отваров трав in vitro производилось по следующим схемам.
· Схема №1 профилактического использования препарата: внесение препарата за 1 ч до инфицирования клеток вирусом. Для этого разведения отваров трав на питательной среде вносили в лунки планшета с монослоем клеток, через 1 час отвар удаляли, монослой клеток отмывали 2-кратно средой Игла МЭМ с антибиотиками. Далее в лунки планшета вносили один из вирусов (вирус гриппа либо вирус кори, либо вирус паротита) в разных разведениях и инкубировали в течение 30 мин при 37 0С. После этого надклеточную жидкость удаляли и в лунки планшета вносили среду ДМЭМ с добавлением 2% фетальной сыворотки, глютамина и антибиотиков. Клетки культивировали в течение 5 суток при температуре 37 0С в атмосфере 5% СО2, ежедневно визуально регистрируя изменения состояния монослоя.
· Схема №2 экстренно-профилактического использования препарата: внесение препарата через 1 ч инфицирования клеток вирусом. После инкубации вирус удаляли, а в лунки вносили питательную среду ДМЭМ с добавлением 2% фетальной сыворотки, глютамина и антибиотиков, содержащую отвар трав. После этого клетки культивировали в течение 5 суток при температуре 37 0С в атмосфере 5% СО2, ежедневно визуально регистрируя изменения состояния монослоя.
· Схема №3 лечебного использования препарата: внесение препарата через 24 ч после инфицирования клеток вирусом. После инкубации вируса (1 час) вирус удаляли, а в лунки вносили питательную среду ДМЭМ.Через 24 ч в лунки планшета вносили разведения отвара трав на питательной среде ДМЭМ с добавлением 2% фетальной сыворотки, глютамина и антибиотиков. После этого клетки культивировали в течение 5 суток при температуре 37 0С в атмосфере 5% СО2, ежедневно визуально регистрируя изменения состояния монослоя.
Оценку значения 50% тканевой цитопатической дозы (ТЦПД50) проводили по методу Спирмена-Кербера (Ашмарин И.П., Воробьев А.А., 1962) Антивирусную активность отваров оценивали по эффективности подавления вирусной репликации в клетках и выражали как % защиты, значение которого вычисляли как отношение ТЦПД50 для монослоя зараженных вирусом и обработанных отваром клеток к ТЦПД50 для монослоя зараженных вирусом клеток. Статистическую обработку результатов проводили по критерию Стьюдента (Закс Л., 1976).
Для изучения антивирусного действия препарата в экспериментах in vivo на модели штамма вируса гриппа птиц использовали заражение беспородных белых мышей штаммом A/Chicken/Kurgan/05/2005 вируса гриппа птиц (субтип Н5N1) [Патент №2361917 от 20.02.08 года]. Мышей перед заражением анестезировали с помощью эфира, каждой мыши интраназально вносили по 0,03 мл приготовленной вируссодержащей жидкости.
Изучение противовирусного действия отваров проводили по схеме лечебно-профилактического использования препарата: мышам (10 шт.) препарат вводили перорально в объеме 0,1 мл до заражения вирусом гриппа птиц в течение 4 суток, сразу после заражения и через 4 ч после заражения, а далее ежедневно 2 раза в сутки в течение 6 дней.
Контрольной группе животных (10 шт.) — в течение 4 суток, за 1 ч до заражения мышей ВГП и через 4 ч после заражения, а далее дважды в течение 6 суток вводили перорально препарат «Тамифлю» в дозе 0,2 мг в объеме 0,1 мл.
Группе животных — отрицательный контроль (10 шт.) — за 4 суток до заражения вирусом гриппа и в течение 6 суток после заражения вводили перорально 2 раза в сутки дистиллированную воду в объеме 0,1 мл.
Инфицированных ВГП мышей наблюдали ежедневно в течение 15 суток после заражения, отмечая количество погибших и выживших мышей. Данные по гибели животных использовали для оценки параметров средней продолжительности жизни (СПЖ) и процента выживших животных(коэффициент защиты).
Для определения коэффициента защиты использовали формулу:
КЗ=(% гибели в контроле)–(% гибели в опыте),
где: КЗ — коэффициент защиты животных.
Животных содержали на стандартном рационе с достаточным количеством воды согласно ветеринарному законодательству и в соответствии с требованиями по гуманному содержанию и использованию животных в экспериментальных исследованиях (Национальный научно-исследовательский совет, 1996).
Было показано, что отвары трав не обладают цитотоксическим действием в отношении клеток Vero и MDCK во всех использованных разведениях.
В экспериментах in vitro было продемонстрировано выраженное противовирусное действие препарата на основе жимолости японской во всех использованных схемах применения (лечебной, профилактической и экстренно-профилактической) против всех использованных вирусов (вирусы гриппа, кори и паротита). Использование даже минимальных разведений отвара практически полностью (98–99.9 %) подавляло вирусную репродукцию. Меньшую противовирусную активность на моделях вирусов кори и паротита в экспериментах in vitro показала смесь двух отваров: вайда корень+жимолость японская (1:1). Указанная смесь отваров ингибировала размножение вирусов, подавляя репликацию более чем на 90 %. Следует отметить, что использование смеси двух этих отваров не показала кумулятивного эффекта.
Установлено, что при проверке противовирусной активности отвара на основе жимолости японской в лечебно-профилактической схеме применения эффективность защиты беспородных белых мышей, инфицированных дозой 10 ЛД50 вируса гриппа птиц, составляла 45%. Эффективно показал себя препарат, приготовленный из корня вайды — коэффициент защиты составил 30 %. При этой схеме применения препарата его эффективность была сравнима с эффективностью препарата «Тамифлю».
Таблица 1.
Изучение противовирусного действия отваров китайских трав in vivo на модели мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц
Таким образом, была показана противовирусная активность в отношении вирусов гриппа, кори и паротита в экспериментах in vitro с использованием препарата на основе жимолости японской во всех использованных схемах применения (лечебной, профилактической и экстренно-профилактической). В экспериментах по изучению противовирусной активности препаратов in vivo на модели мыши, инфицированной вирусом гриппа птиц субтипа H5N1 штаммом A/Chicken/Kurgan/05/2005, антивирусную активность показали препараты на основе жимолости японской и вайды корень в лечебно-профилактической схеме применения.
Список использованных литературных источников
1. Ашмарин И. П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях // Л.: Гос. изд. мед. лит., 1962.
2. Дзюба В. Ф., Николаевский В. А. Лекарственные растения в фитотерапии: Практическое пособие. — Воронеж, 2004.
3. Eunkyue Park et al. Anti-inflammatory Activity of Herbal Medicines: Inhibition of Nitric Oxide Production and Tumor Necrosis Factor-α Secretion in an Activated Macrophage-like Cell Line // The American Journal of Chinese Medicine (AJCM). — 2005. — Vol. 33 Issue. 3.— Page: 415–424.
4. Chang Pu Tao. Traditional Chinese Medicine // Beijing Zhongyi Magazine.— 2002.— 21(2). — P. 74–76.
5. Poon,-P-M; Wong,-C-K; Fung,-K-P. et al. Immunomodulatory effects of a traditional Chinese medicine with potential antiviral activity: a self-control study // Am-J-Chin-Med. — 2006. — 34(1). — P. 13–21.
|
© Ортилия. Все права защищены.